Utiliser un spectrophotomètre

Fiche pratique

Introduction

Un spectrophotomètre permet de mesurer l’absorbance d’une solution colorée pour une longueur d’onde donnée.

Matériel

Etapes

Allumer le spectrophotomètre

Brancher le spectrophotomètre sur une prise secteur, appuyer sur le bouton « ON » et choisir le mode « A » pour absorption.

Étalonner le spectrophotomètre

Remplir aux trois quarts une cuve avec le solvant de la réaction. Le solvant est ce qu’on ne souhaite pas mesurer.
Placer la cuve dans le spectrophotomètre en faisant attention à la direction du rayon lumineux : il faut que celui-ci traverse la cuve par ses faces transparentes.
Fermer la porte et sélectionner, à l’aide des flèches, la longueur d’onde pour laquelle l’absorbance est la plus élevée.
Appuyer ensuite sur le bouton « zéro » pour refaire une mesure d’absorbance.

Réaliser une mesure

Placer une cuve remplie aux trois quarts avec la solution à analyser.
Fermer la porte et regarder la mesure de l’absorbance de la solution.
De la même manière, répéter l’opération pour réaliser les mesures d’absorbance pour toute une gamme de solution.

Interpréter les résultats

Le spectrophotomètre peut afficher des messages d’erreur comme une valeur négative si l’absorbance est trop faible. Il faut alors concentrer la solution et refaire toute la manipulation ainsi que le blanc.
De même, il peut afficher « $> 2$ », si la solution est trop concentrée, il faut alors diluer la solution et reprendre la manipulation depuis le début.
Utilisez la loi de Beer-Lambert pour calculer la concentration d’une solution à partir de son absorbance.

Éteindre le spectrophotomètre